Общая информация:ДНКаза I гидролизует одноцепочечную и двухцепочечную ДНК (в том числе хроматин) при нейтральном значении рН (оптим. рН = 7.8) с образованием полинуклеотидов, содержащих 5’-фосфатные группы и свободные гидроксильные группы в положении 3’. Активность и специфичность (одноцепочечный против двухцепочечной) ДНКазы I определяется окружающими ионами. Максимальная активация требует присутствия ионов Mg2+ и Са2+. Ионы магния в основном способствуют одноцепочечному разрыву, в то время как присутствие ионов Mn2+ способствует двуцепочечному разрыву.
ДНКаза I замедляет хелаторы, такие как цитрат, ЭДТА и SDS или β-меркаптоэтанол.
Применение:Растворите ДНКазу в концентрации 2 мг/мл в 0.15 М хлорида натрия или рабочего буферного раствора (например, 50 мМ Трис-HCl, рН 7.5; 50 мкг/мл БСА, 10 мМ MgCl2 или 10 мМ MgCl2).
- Тепловая инактивация ДНКазы I: нагрейте до 99°С в течение 10 минут.
- Получение свободной от РНКазы ДНКазы I: растворите 1 мг/мл ДНКазы I в 0.1 М йодуксусной кислоты плюс 0.15 М ацетата натрия при конечном рН 5.3. Нагрейте до 55°С в течение 40 минут, затем охладите раствор. Добавьте 1 M CaCl2 до конечной концентрации 5 мМ. Храните в виде небольших аликвот при -20°С.
